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技術(shù)文章

高效液相色譜儀的優(yōu)缺點(diǎn)及其對(duì)流動(dòng)相的要求

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高效液相色譜儀也叫高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜等,它是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上,于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。
 
高效液相色譜儀的優(yōu)缺點(diǎn):
 
優(yōu)點(diǎn):分離效率高,選擇性好,檢測靈敏度高,操作自動(dòng)化,應(yīng)用范圍廣;
 
與氣相色譜法相比具有的優(yōu)點(diǎn):不受試樣的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性限制,應(yīng)用范圍廣;流動(dòng)相種類多,可通過流動(dòng)相的優(yōu)化達(dá)到高的分離效率;一般在啊室溫下分析即可,不需高柱溫。
 
缺點(diǎn):分析成本高,液相色譜儀價(jià)格及日常維護(hù)費(fèi)用貴,分析時(shí)間一般比氣相長。
 
高效液相色譜對(duì)流動(dòng)相的要求有哪些?
 
1、純度:流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細(xì)的膜過濾)。溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累,會(huì)影響色譜柱的使用壽命。
 
2、溶解度:樣品的溶解度要適宜如果溶解度,如果溶解度欠佳樣品會(huì)在柱頭沉淀,不但影響純化分離,還會(huì)縮短柱子的使用壽命。
 
3、粘度要低(應(yīng)<2cp) 高粘度溶劑會(huì)影響溶質(zhì)的擴(kuò)散、傳質(zhì),降低柱效,還會(huì)使柱壓降增加,使分離時(shí)間延長。*選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動(dòng)相。
 
4、樣品易于回收。應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。
 
5、流動(dòng)相:PH采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時(shí),通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。對(duì)于弱酸,流動(dòng)相的pH值越小,組分的k值越大,當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí),弱酸主要以分子形式存在;對(duì)弱堿,情況相反。分析弱酸樣品時(shí),通常在流動(dòng)相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時(shí),通常在流動(dòng)相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

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